1. Тромерова проба
Откриването на монозахариди в състава на изследваните проби се основава на наличието на свободна карбонилна група в молекулата им, която се окислява лесно от някои слаби окислители (например медни соли). Въглехиратите притежаващи свободна карбонилна група (при образуването на полуацеталните пръстенни форми се получава гликозидна група) се наричат редуциращи захари.
Освен монозахаридите редуциращи свойства имат и дизахаридите от малтозов тип.
За откриване на въглехидрати с редуциращи свойства най-често се използва р-р на CuSO4. Той при взаимодействие с NaOH образува меден дихидроксид (светло синя утайка).
При нагряване на получения меден дихидроксид в присъствие на редуциращи захари карбонилната им група се окислява до карбоксилна, а медния дихидроксид се редуцира до меден хидроксид, който при загряване се разлага.
2. Фелингова проба
При тази проба се използва Фелигов реактив, който се получава при смесване на равни количества Фелинг І (Cu(OH)2) и Фелинг ІІ (сегнетова сол и NaOH).
В резултат на взаимодействието на CuSO4 и NaOH се получава Cu(OH)2, който веднага встъпва в реакция със сегнетовата сол (калиево-натриев тартарат) с образуване на тъмносиньо комплексно съединение.
При нагряване в присъствие на въглехидрати с редуциращи свойства се получава керемидено-червено оцветяване дължащо се на получения Cu2O.
! За разлика от Тромеровата проба свързването на Cu(OH)2 в комплексно съединение със сегнетовата сол пречи на образуването на черна утайка от CuO.
3. Качествена реакция за доказване на скорбяла – йодна проба.
Скорбялата е главен въглехидратен резерв при растенията и при
микроорганизмите. Изградена е от глюкозни остатъци.
Скорбялата е изградена от два вида полизахаридни вериги:
1 . Амилоза — с неразклонена верига от глюкозни остатъци. Молекулата на амилозата е спирално навита, наподобяваща пружина, по оста на която има празнини. Навлезлите в тези празнини йодни молекули изменят способността си да абсорбират светлинните лъчи. На това се дължи синята цветна реакция на амилозата с йода. Това съединение е термолабилно.
2. Амилопектин — със силно разклонени вериги, като разклоненията се дължат на възникване на гликозидни връзки между първия въглероден атом на даден глюкозен остатък и шестия въглероден атом на друг глюкозен остатък (1—6).
С тази реакция може да се открие нишесте или брашно в подправено мляко.
Указания за практическа работа:
1. Тромерова проба
А/ Необходими материали: 10% NaOH, 5% CuSO4, 1% захароза, 1% глюкоза, 1% скорбяла, сок от ябълка, сок от грозде, сок от картоф.
Б/ Ход на анализа: В епруветки се налива по 1 ml 10% NaOH.
В първата епруветка се налива 1 ml H2O, а в останалите по 1 ml от разтворите на въглехидрати. Към всяка от епруветките се добавя на капки 5% CuSO4 (при непрекъснато разбъркване) до появата на устойчива мътилка. Сместа се загрява до кипене. При наличие на малки количества редуциращи захари оцветяването се променя през жълто-зелено до керемидено-червена утайка.
2. Фелингова проба
А/ Необходими материали: Фелинг І (5% CuSO4), Фелинг ІІ (сегнетова сол и NaOH), 1% захароза, 1% глюкоза, 1% скорбяла, сок от ябълка, сок от грозде, сок от картоф.
Б/ Ход на анализа: Смесват се равни количества по 5 ml от разтворите на Фелинг І и Фелинг ІІ. В епруветки се налива по 1 ml от получения Фелингов реактив. В първата епруветка се налива 1 ml H2O, а в останалите по 1 ml от разтворите на въглехидрати. Сместа се загрява до кипене. При наличие на редуциращи захари се появява керемидено-червена утайка.
4. Йодна проба.
А/ Необходими материали: Луголов разтвор (разтвор на I2 в KI),
1% захароза, 1% глюкоза, 1% скорбяла, сок от ябълка, сок от грозде, сок от картоф.
Б/ Ход на анализа: В епруветки се налива съответно в първата 1 ml H2O, а в останалите по 1 ml от разтворите на въглехидрати. Към всяка епруветка се добавя на капки Луголов разтвор. При наличие на скорбяла се получава синьо-виолетово оцветяване. Загрейте внимателно епруветката и наблюдавайте промените в оцветяването.
Здравословни и безопасни условия на труд
1. NaOH е силно корозивна. Предизвиква тежки изгаряния. Може да предизвика сериозни трайни увреждания на очите. Опасна е при поглъщане, контакт с кожата или при вдишване на прах.
Меден (II) сулфат е опасен при поглъщане.
2.Йодът е токсичен. Вреден при вдишване и поглъщане през кожата. Лесно се абсорбира през кожата. Разрушава лигавиците на горните дихателни пътища, очите и кожата.
3. Спазвайте правилата за безопасна работа при нагряване със спиртна лампа.
Въпроси и задачи
1. Отчетете резултатите в табличен вид и направете изводи за съдържанието на редуциращи захари в съответните проби.
2. Обяснете разликата в оцветяването в контролната епруветка с водата при Тромеровата и Фелинговата проба.
3. Положителни или отрицателни ще бъдат пробите за разтвор на захароза? Обяснете резултата.
4. Някои плодове съдържат предимно фруктоза. Положителни или отрицателни ще бъдат пробите от техни извлеци? Обяснете резултата.
5. Обяснете промяната в оцветяването след загряване на епруветките с положителна йодна проба.
За любознателните:
Повече за въглехидратите на английски език можете да прочетете тук.
Повече за въглехидратите на руски език можете да прочетете тук.
