В изоелектричния пункт (ИЕП) белтъчните молекули са електронеутрални и загубват хидратационната си обвивка. В такова състояние те агрегират, много лесно се утаяват и лесно се денатурират. Различните белтъци имат ИЕП при различно рН. Повечето природни белтъци имат ИЕП в слабокиселата област на рН, например казеин при рН = 4,6, фибриноген при рН = 5,4 и т.н. Има белтъци с ИЕП в силнокиселата област на рН, например пепсин при рН = 3, а други — в силноалкалната област, например хистоните имат ИЕП при рН=12. В молекулите на киселите белтъци преобладават аминокиселини с киселинни свойства (аспарагинова, глутаминова и други), а в алкалните — аминокиселини с алкални свойства (аргинин, лизин и други).
Определянето на ИЕП може да се демонстрира лесно с разтвор на желатин или на казеин. Когато белтъчният разтвор съдържа няколко вида белтъци, установеният ИЕП е сума от ИЕП на всичките белтъци.

Указания за практическа работа:

А/ Необходими материали: — 0.1 М разтвор па натриев ацетат (CH3COONa), 0.1 М воден разтвор на оцетна киселина (CH3COOH), l M воден разтвор на CH3COOH, 1%-ен воден разтвор на желатин, 96%-ен разтвор на етилов алкохол или 1%-ен воден разтвор на танин
Б/ Ход на анализа: Шест епруветки се зареждат, както е показано в таблицата и се разклащат.

Алкохолът, който се използува като утаител на белтъка, се наслоява внимателно по стените на епруветките най-накрая.
Количеството на утайката се отчита след 30 минути. Максималното количество утайка се означава с (+++), по-малкото количество с (++) и (+), а отсъствието на утайка с (—). ИЕП на желатина може да се колебае в пределите на няколко десети в зависимост от вида му и от начина на производството му.

 

Здравословни и безопасни условия на труд

1. CH3COOH - Силно корозивна субстанция. След контакт с кожата предизвиква изгаряния. След контакт с очите - опасност от ослепяване! След поглъщане - изгаряния на устата, хранопровода и стомаха, повръщане на кръв, стомашни спазми. Не са изключени шок, сърдечносъдова недостатъчност и увреждания на бъбреците.

Въпроси и задачи

1. Нанесете резултатите в таблицата и определете изоелектричния пункт на желатина.

2. На кое свойство на белтъците се основава този метод за определяне на изоелектричния пунк на желатина?

 

За любознателните:

 

Калкулатор на изоелектрични точки на белтъци на английски език може да намерите тук.