Промяната на концентрацията на субстрата или на продукта (за предпочитане е на продукта) в хода на реакцията може да се следи непрекъснато или периодично чрез вземане на проби.
От получените данни за концентрацията на субстрата [S] или концентрацията на продукта [Р] се построяват кинетични криви, изразяващи промените в [S] или в [Р] . По вида на тези криви се съди за хода на ензимната реакция във времето.

Ензимът алфа-амилаза катализира хидролизата на алфа -1,4-гликозидни връзки във вътрешността на полизахаридната молекула на амилозата, амилопектина и др. Под действието на ензима амилозата се разгражда до фрагменти, наречени декстрини, които в хода на реакцията се хидролизират до още по-нискомолекулни олигозахариди. Получаването на тези продукти може да се докаже чрез оцветяване с йод. В зависимост от дължината си тези фрагменти се оцветяват с йод по различен начин. Нискомолекулните олигозахариди не се оцветяват с йод. Последователните стадии на хидролиза на амилозата и оцветяването на продуктите може да се покаже схематично по следния начин:

Указания за практическа работа:

А/ Необходими материали: 2%-ов разтвор на разтворима скорбяла,
р-р на Мезим форте (разтвор на алфа-амилаза), Луголов разтвор
Фелинг I, Фелинг II.
Б/ Ход на опита: В първата епруветка се поставят 3 ml 2%-ов разтвор на скорбяла, а в останалите — по 2 ml разреден луголов разтвор (луголовият разтвор предварително се разрежда с вода до жълт цвят). От съдържимото на първата епруветка се пренасят 2 капки във втората епруветка. След това към първата епруветка се прибавят 10 капки разтвор на алфа-амилаза и епруветката се разклаща добре. Точно след 2 min от смесването на ензима със скорбялата, 2 капки от първата епруветка се пренасят в третата епруветка, след още 2 min 2 капки от първата епруветка се пренасят в четвъртата епруветка. По същия начин през интервал от 2 min от първата епруветка се капват последователно по 2 капки в петата, шестата и т.н. епруветки. Това се повтаря, докато при прибавяне на капки от първата епруветка цветът на луголовия разтвор в поредната епруветка повече не се променя. Ако това не стане до десетата епруветка се наливат още няколко епруветки с луголов разтвор.

С пробата останала в първата епруветка, се прави Фелингова проба.

Здравословни и безопасни условия на труд

1. NaOH е силно корозивна. Предизвиква тежки изгаряния. Може да предизвика сериозни трайни увреждания на очите. Опасна е при поглъщане, контакт с кожата или при вдишване на прах.
Меден (II) сулфат е опасен при поглъщане.

2.Йодът е токсичен. Вреден при вдишване и поглъщане през кожата. Лесно се абсорбира през кожата. Разрушава лигавиците на горните дихателни пътища, очите и кожата.
4. Спазвайте правилата за безопасна работа при нагряване със спиртна лампа.

Въпроси и задачи

1. Отчетете оцветяването на луголовия разтвор от втората до последната епруветка.

2. На какво се дължи оцветяването на скорбялата с Луголов разтвор?

3. Изразете графично получените резултати. Като свържете получените точки, ще получите крива, която показва хода на ензимно катализираната реакция във времето.

4. При построяването на графиката използвайте компютър и възможностите на Microsoft office.

5. Анализираите хода на кривата и направете изводи.

6. Какво показва положителната Фелингова проба в първата епруветка?

 

За любознателните:

 

Повече за ензимите на английски език можете да прочетете тук.
Повече за ензимите на руски език можете да прочетете тук.